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細胞培養是一種重要的生物學技術,可以使研究人員在體外繁殖和研究細胞,已經廣泛應用于醫學、生物學、農業、食品工業等領域,成為現代生命科學的重要組成部分。細胞培養是將細胞放入一定的培養基中,提供適宜的培養環境,使其在體外繁殖和生長。基本原理是在一定的培養基中提供足夠的營養物質和適宜的生長條件,如溫度、濕度、氧氣、二氧化碳等,使細胞能夠不斷繁殖和生長。隨著技術的不斷發展,現在已經可以培養各種類型的細胞,包括哺乳動物細胞、微生物細胞、植物細胞等。細胞培養需要提供適宜的培養條件,如溫度...
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一些細胞和組織可在懸浮狀態下生長,但相當一部分哺乳動物細胞需要表面貼壁。因此,用于提供細胞體外培養環境的培養瓶、培養板和培養皿除了具有良好的透明度和無毒、無菌外,還需經表面改性處理使之能夠貼壁、分裂和生長。細胞培養瓶瓶體設計合理,表面TC處理,適用于實驗室中等規模細胞和組織培養。細胞培養瓶是實驗室進行長時間細胞培養、大量細胞擴增和防污染的合適培養器皿。未處理表面適用于懸浮細胞培養;TC處理表面,經過處理后聚苯乙烯表面具有較好親水性,適用于常見細胞系的粘附和伸展;超親水處理表面...
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凋亡(Apoptosis),或者說程序性細胞死亡(Programmedcelldeath),是細胞內建的防御機制之一,在生物的正常發育及疾病抵御中起到重要的作用。凋亡過程與通路的異常,會導致多種疾病,包括腫瘤。目前至少有十數種檢測細胞凋亡的方法,從大框架上講,可以劃分為基于細胞形態、生物學功能和生化標記三大類。然而,每一種方法都有其優缺點,且并非所有的方法對每一位實驗人員來說都是實用的。細胞凋亡(Apoptosis)是細胞程序性死亡(Programmedcelldeath)的...
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原代培養的細胞,來源于胚胎、組織器官和外周血,通過特殊的分離方法制備,稱為原代細胞。初步分離得到的細胞具有與體內細胞相似的生物學特性,是研究生進行與物體相關的生命活動的理想材料。原代細胞分離培養是從體內取出人/小鼠模型動物特異性細胞,用胰蛋白酶和螯合劑(EDTA)處理,分散成單細胞,并在合適的培養基中培養,使得細胞能夠存活、生長和繁殖的過程。原代培養是指細胞、組織和器官直接從體內取出后立即進行培養。此時的細胞保持了原細胞的基本性質,如果是正常細胞,則仍保留二倍體數。但實際上,...
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成纖維細胞比心肌細胞更容易貼壁,具有分裂增殖能力。差異貼壁后,原代心肌細胞間中仍有少數成纖維細胞混雜,如果處理不當,很容易長成優勢細胞。溴脫氧尿苷(BrdU)可以干擾細胞有絲分裂,因此BrdU常規用于抑制成纖維細胞的生長。但如果用胎牛血清培養細胞,由于胎牛血清含有很多促有絲分裂因子,BrdU很難抑制成纖維細胞的生長。使用小牛血清可以克服這種現象,獲得90%以上的心肌細胞。觀察原代心肌細胞間形態時,接種密度低,貼壁心肌細胞數量減少。為了防止存活的心肌細胞隨著液體的更換而被丟棄,...
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細胞外泌體是細胞分泌的大小約為30-150nm的納米物質,是細胞外囊泡的一類,結構類似于細胞,磷脂雙分子層表面具有多種特異性膜蛋白,內部搭載著多種蛋白質、RNA、DNA等重要生物信號物質,廣泛分布于血液、尿液、腦脊液、唾液、乳汁、膽汁等各種體液中。外泌體的來源細胞種類非常豐富,幾乎在人體血液、尿液、母乳和唾液等多種體液中都能發現它的蹤跡。可傳遞包括DNA、RNA、miRNA、脂質和蛋白質在內的多種生物活性物質,同時保護包裹的內含物免受核酸酶和蛋白酶,以及外界壞境變化引起的降解...
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CellCountingKit-8(簡稱CCK-8)試劑可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。CCK-8&MTT方法比較方法優點缺點CCK-8法靈敏度高、不使用有機溶劑、檢測迅速、重復性好價格較MTT貴、CCK8試劑的顏色為淡紅色、與含酚紅的培養基顏色接近,容易漏加或多加MTT法價格便宜操作步驟較多,需要使用有機試劑,靈敏度不如CCK-8,多數需要配制,檢測時間長,細胞毒性較高一、原理:CCK-8是MTT的升級產品,其基本原理為:該試劑中含有WST-8【化學名:2-(2-甲氧...
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一、材料與儀器:大鼠、裂解緩沖液、濃蔗糖溶液、超速離心機、組織研磨器二、實驗步驟:1.配制裂解緩沖液和濃蔗糖溶液(PMSF在使用前添加),冰上放置。裂解緩沖液:①0.25mol/L蔗糖網織紅細胞標準緩沖液(RSB)②0.25mol/L蔗糖(超級純)③10mmol/Tris-HCl(pH7.4)④10mmol/LNaCl⑤3mmol/LMgCl2⑥1mmol/LDTT⑦0.5mmol/LPMSF(用前從溶于乙醇的100mmol/L貯存液中添加)濃蔗糖溶液:①2mol/L蔗糖RS...
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